华南理工大学学报(自然科学版)

作者：胡松青, 袁家惠, 刘光毅, 等

单位：1.华南理工大学 食品科学与工程学院, 广东 广州 510640；2.广州英赞生物科技有限公司, 广东 广州 510555；3.华南理工大学 轻工科学与工程学院, 广东 广州 510640

关键词：Taq DNA聚合酶,双链DNA结合蛋白,耐受性,聚合酶链式反应

基金：广东省基础与应用基础研究基金资助项目(2021A1515220141)

Taq DNA聚合酶作为实时荧光定量聚合酶链式反应（qPCR）技术的核心组分，其性能优劣直接影响qPCR技术的进一步发展。然而，野生型Taq DNA聚合酶的耐抑制剂性能差、延伸性能不足。为获得具有高性能的Taq DNA聚合酶，采用基因工程技术将双链DNA结合蛋白Sso7d或Sto7d融合在野生型Taq DNA聚合酶的N端或C端，构建了4个均可溶表达的改造体，再经过耐受性测试筛选较优的改造体，结果显示：改造体Taq-Sto的耐受性最高，其热稳定性不受影响，且在1 s/kbp的延伸条件下能成功扩增靶标，表明Taq-Sto具有增强的延伸性能，在TaqMan探针法qPCR体系中对腐殖酸、单宁酸、全血等抑制剂同样表现出良好的耐受性。EMSA实验发现：Taq-Sto对DNA模板的结合亲和力有所提高，有利于增强Taq-Sto对模板的竞争力；将Taq-Sto应用于非洲猪瘟病毒（ASFV）的TaqMan探针法qPCR检测，与商品化试剂相比，Taq-Sto具有更低的ASFV检出限，且在体积分数为2%~6%的猪粪便样本或猪肉样本中的检测灵敏度分别为100.0%和85.4%，说明Taq-Sto在直扩qPCR检测领域更具有优势。

来源：2024年第4期

《华南理工大学学报(自然科学版)》期刊编辑部

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