华南理工大学学报(自然科学版)

作者：杨艳歌, 吴占文, 李涛, 等

单位：1.中国检验检疫科学研究院 国家市场监管重点实验室（食品质量与安全），北京 1001762.黑龙江八一农垦大学 生命科学技术学院，黑龙江 大庆 163000

关键词：诺如病毒,重组质粒,酶促重组等温扩增,可视化,快速检测

基金：中国检验检疫科学研究院基本科研业务费专项(2022JK36);国家重点研发计划项目(2022YFF0607900)

诺如病毒（NoV）是常见的食源性病毒之一，只要极少数量的NoV就可以导致机体感染发病，但目前还没有特效的治疗药物和疫苗，因此建立快速检测方法对食品中的NoV进行早期筛查至关重要。本研究首先通过装甲RNA技术将GB 4789.42规定的GI和GII NoV的靶标基因包裹到MS2噬菌体的衣壳蛋白中，制成内含GI和GII NoV两联检测靶标的重组质粒参考样品，其次基于酶促等温扩增（ERA）技术，分别设计了GI和GII NoV基础型ERA和荧光型ERA检测的引物和探针，并通过试验筛选确定了最佳的引物探针组合。从而建立了GI和GII NoV检测ERA显色法和荧光法两种可视化方法，通过肉眼可直接观测结果。进一步对反应程序进行了优化，将ERA显色法和荧光法的扩增时间分别缩短至5 min和8 min。并通过对反应体系的优化，将体系减半，从而降低了检测成本。在此情况下，对核酸参考样品检测的最低灵敏度分别可达10-2、10-3 ng/μL。最后将本研究建立的可视化快速检测方法应用于真实的GI和GII NoV粪便样本检测，并对方法的性能参数进行分析，结果显示：建立的GI和GII NoV ERA可视化快速检测方法特异性良好，对其他食源性病毒无交叉扩增，最低可检出10拷贝/μL的NoV，可以满足GI和GII NoV可视化快速筛查的需求。本研究方法的建立为NoV的快速筛查和风险监测提供了良好的技术支撑，对于控制NoV爆发、保障人民健康具有重要意义。

来源：2023年第12期

《华南理工大学学报(自然科学版)》期刊编辑部

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