华南理工大学学报(自然科学版)

作者：谢秋玲, 罗美华, 雷云, 等

单位：1． 暨南大学 生命科学技术学院，广东 广州 510632; 2． 基因工程药物国家工程研究中心，广东 广州 510000

关键词：纳米抗体,血管内皮生长因子,噬菌体文库,筛选

基金：广东省科技计划项目 (2015A020211016)

血管内皮生长因子 (VEGF) 是一种特异性的促血管内皮细胞生长因子，与肿瘤侵袭、转移、预后和复发密切相关。本研究为表达筛选与 VEGF 具有亲和特异性的纳米抗体，首先利用 VEGF 免疫羊驼，提取外周血淋巴细胞总 RNA，构建噬菌体文库;并多次淘洗筛选到与 VEGF 有亲和力的克隆，筛选到 10 个与 VEGF 有亲和力的 VHH 基因片段。然后通过软件分析其亲水性、分子质量等理化性质，发现这 10 个 NbVEGF 蛋白均为亲水性蛋白，其分子质量在 20. 1 ～ 20. 7 kDa 之间。同时在大肠杆菌中重组表达这10 个抗体蛋白，经 Ni 金属螯合亲和层析纯化后的 NbVEGF 的蛋白纯度均大于 80%。最后采用酶联免疫吸附试验 (ELISA) 检测蛋白的抗原特异性和亲和力。结果表明: 有 3 个纳米抗体 NbVEGF-3、NbVEGF-7 和 NbVEGF-10 能与 VEGF 特异性结合，且 NbVEGF-3 的亲和力与阳性对照一致，其他纳米抗体均无 VEGF 抗性。本研究成功筛选并表达了 3 个具有VEGF 特异性的纳米抗体，且其中 NbVEGF-3 有较好的抗原亲和力，可能是一种抗 VEGF的候选药物。

来源：2020年第9期

《华南理工大学学报(自然科学版)》期刊编辑部

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